Sa ré iar-eipidéim, tá an téarma "tástáil aigéid núicléasaigh" ar an eolas ag gach duine againn, agus is cuid dár saol laethúil é.
Mar sin, an bhfuil a fhios agat conas a aimsíonn tástáil aigéid núicléacha víris? Agus conas a dhéanann tástáil aigéid núicléacha víris dofheicthe "infheicthe"?
01 Cad is aigéad núicléasach ann
Is é aigéad núicléach an téarma ginearálta do DNA agus RNA.
Tá aigéad núicléach ina chomhpháirt riachtanach den bheatha aitheanta ar fad ar domhan. Is é an DNA a deirimid go minic ná aigéad deocsairibonúicléach. Is é ábhar géiniteach an choróinvíris nua ná RNA - aigéad ribonúicléach.
Tástáil aimplithe aigéid núicléigh
02 Cad go díreach a bhraitheann tástáil aigéid núicléigh?
Is é an tsubstaint chun aigéad núicléach a bhrath ná aigéad núicléasach an víris.
Is víreas é an coronavirus nua nach bhfuil ann ach RNA, agus is marcóir é an t-ord sonrach RNA sa víreas a dhéanann idirdhealú idir an víreas agus pataiginí eile. Is éard atá i gceist le haigéad núicléach a bhrath ná a fháil amach an bhfuil aigéad núicléach de víreas ionradh coigríche in eiseamal riospráide nó fola an othair chun a chinneadh an bhfuil an coróinvíreas nua ionfhabhtaithe aige. Úsáideann formhór mór na braite aigéid núicléigh reatha an choróinvíris nua an modh PCR cainníochtúil fluaraiseacha chun seicheamh sprice an RNA víreasach a mhéadú trí PCR tar éis trascríobh droim ar ais.
Is teicníc bitheolaíochta mhóilíneach é PCR, nó imoibriú slabhra polaiméireáis, a úsáidtear chun blúirí DNA sonracha a aimpliú; tagraíonn sé don imoibriú DNA polaiméaráise-catalyzed de ghéinte sonracha nó Tugtar aimpliú géine in vitro ar imoibriú aimpliú tapa in vitro ar sheichimh DNA freisin. Is é teicneolaíocht chainníochtúil PCR fluaraiseacha ná córas tuairisceora fluaraiseachta a chur leis an gcóras imoibrithe PCR, agus an t-athrú comhartha fluaraiseachta a úsáid chun monatóireacht a dhéanamh ar an bpróiseas PCR i bhfíor-am, ionas go mbainfear amach braite cainníochtúil an teimpléid tosaigh.
Chun aigéad núicléach a bhrath, is é an chéad chéim ná sampla a bhailiú. Faoi láthair, is é an modh samplála is traidisiúnta ná: bain úsáid as táithíní scornach nó táithíní sróine chun an chonair riospráide uachtarach (pharynx nó cavity nasal) a ghlanadh agus a bhailiú; déanfar na samplaí bailithe a shéalú go docht, agus ansin iad a sheoladh chuig an saotharlann le haghaidh tástála de réir a chéile.
1. Eastóscadh RNA víreasach
Baintear RNA an víreas as an sampla ar dtús. Cuir imoibrithe eastósctha aigéid núicléacha leis an sampla chun an víreas a scriosadh agus an t-aigéad núicléach a scaoileadh.
2. "Trascríobh droim ar ais" de RNA víreasach isteach i cDNA
Trí theicneolaíocht trascríobh droim ar ais (RT), déantar RNA an víreas a "aisiompú" isteach i DNA ar leith atá níos áisiúla a bhrath, is é sin, cDNA.
3. CDNA a mhéadú agus a bhrath
Go deimhin, cibé an swab scornach é, swab nasal nó fiú sampláil fola, tá an t-ábhar víreas sa sampla sách íseal, fiú in othair atá ionfhabhtaithe go mór (tá an t-ualach víreasach mór); toisc go bhfuil na cáithníní víreas ró-bheag agus go bhfuil an méid samplála teoranta, Tá líon na víris atá sa sampla fós ró-bheag chun aigéad núicléach a bhrath.
Mar sin, trí úsáid a bhaint as teicneolaíocht PCR, déanann na cigirí "focal faire" uathúil an choróinvíris nua a mhéadú sa sampla go dtí an pointe inar féidir leis an trealamh é a bhrath, chun a mheas an ionfhabhtú dearfach é. Tá an próiseas iomlán chun ábhar géiniteach an víris a ghabháil cosúil le hiascaireacht. Déanfaidh an duán a aithint agus a ghabháil, ionas nach mbeidh aon áit ag an víreas a cheilt.
Níl ort ach a chur, tá sé chun líon na cDNA a mhéadú, ionas go ndéanfar an cDNA a mhacasamhlú go leanúnach, ionas go méadóidh an líon go heaspónantúil.
Tá an próiseas caighdeánach PCR roinnte ina thrí chéim:
Dínádúrú: Úsáid teocht ard chun na snáitheanna dúbailte DNA a scaradh. Déantar na naisc hidrigine idir snáitheanna dúbailte DNA a bhriseadh ag teocht ard (93 - 98 céim ).
Anáil: Tar éis na snáitheanna dúbailte DNA a bheith scartha, íslítear an teocht chun ligean do na primers ceangal leis an DNA aonshnáithe.
Síneadh: Sintéisíonn polaiméaráis DNA snáithe comhlántach feadh an tsnáithe DNA ón bpriméir atá faoi cheangal nuair a íslíonn an teocht. Nuair a bhíonn fadú críochnaithe, críochnaítear timthriall amháin agus déantar líon na blúirí DNA a dhúbailt. Déan na trí chéim seo arís 25-35, agus méadóidh líon na blúirí DNA go heaspónantúil.
Teimpléad le snáithe dúbailte PCR
Cé go bhfuil an cDNA á aimpliú, tá na taiscéalaithe fluaraiseacha sa trealamh ag obair go comhuaineach. Scaoilfidh sé comhartha fluaraiseacha, agus gach uair a aimplítear an cDNA, méadóidh an comhartha fluaraiseacha beagán, agus is féidir leis an brathadóir PCR luach Ct méadú comhartha fluaraiseacha a thaifeadadh.
Is táscaire tábhachtach é an luach Ct chun a mheas an bhfuil an víreas aigéad núicléasach diúltach nó dearfach. Dá lú DNA tosaigh, is mó timthriallta PCR a theastaíonn chun tairseach áirithe a bhaint amach, agus is airde an luach Ct. Os a choinne sin, dá mhéad DNA tosaigh, is lú an luach Ct. Léiríonn an méid tosaigh DNA an méid RNA víreasach sa sampla, rud a léiríonn an méid víreas sa sampla. Dá bhrí sin, mura n-aimsítear an luach Ct nó go bhfuil sé níos airde ná luach áirithe, ansin déantar an t-othar a bhfuil amhras ann a mheas mar dhiúltach; má tá sé níos ísle ná an luach seo, ansin meastar go bhfuil an t-othar amhrasta dearfach.
Le linn an imoibrithe PCR, tá roghnú na n-earraí inchaite PCR ar cheann de na fachtóirí is tábhachtaí a dhéanann difear do thorthaí braite aigéid núicléacha.
